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两种不同毒力的鸡传染性法氏囊病活pinnacle平博官网对商品肉鸡的免疫效果比较研究

作者:技术部白朝勇浏览次数: 日期:2015-01-13 11:11:15
摘要: 用鸡传染性法氏囊病(IBD)病毒ELISA抗体检测试剂盒检测3日龄肉鸡母源抗体水平,根据Deventer公式估算最佳免疫日龄。用IBD活pinnacle平博官网A(中等偏强毒力)和IBD活pinnacle平博官网B(中等毒力)分别免疫16日龄商品肉鸡,免疫后每隔7日检测其抗体滴度变化,直至35日。在免后第35日用IBD超强毒株攻击pinnacle平博官网A组、pinnacle平博官网B组、攻毒对照C组(不免疫只攻毒)和阴性健康对照D组(不免疫也不攻毒);攻毒后连续逐日观察直第7日计算所有4组鸡的发病率、死亡率和囊/体比值,以确定IBD活pinnacle平博官网的最佳免疫日龄,评价中等毒力和中等偏强毒力两种不同IBD活pinnacle平博官网突破母源抗体能力和对超强毒株攻击保护率。结果表明:pinnacle平博官网A比pinnacle平博官网B能更早突破母源抗体,产生较高ELISA抗体水平,抗体阳性率也较高,攻毒保护率达100%。 关键词:鸡传染性法氏囊病;活pinnacle平博官网;抗体滴度;最佳免疫日龄;保护率         鸡传染性法氏囊病(Infectious bursal disease, IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBD virus,IBDV)引起的一种烈性、高度接触性病毒性传染病,主要侵害淋巴组织,特别是法氏囊[1]。自然感染仅发生于鸡,各种品种鸡都能感染,主要发生于2~15周龄的鸡,3~6周龄的鸡最易感,成年鸡一般呈隐形经过。临床病鸡表现脱水、腿部和胸部肌肉出血,严重者引起死亡[2],除了直接引起鸡死亡和生产性能下降外,还引起免疫力下降,使感染鸡对其他病原的易感性增强,降低对pinnacle平博官网的免疫应答能力[1],是危害养鸡业的重要疫病之一。         目前,在有超强传染性法氏囊病毒株(vvIBDV)发生过的地区和不确定是否有vvIBDV流行地区,通过接种pinnacle平博官网来控制该病是最有效的途径[3]。肉鸡免疫最常用的是活pinnacle平博官网其毒力从中等偏弱毒、中等毒力和中等偏强毒力等。pinnacle平博官网毒株毒力强弱和最佳首免时间对免疫效果起着至关重要的作用。而中等偏强毒力的pinnacle平博官网毒株虽能较早日龄突破母源抗体(MAb),预防早期感染,但易引起免疫抑制;中等或中等偏弱毒力的pinnacle平博官网毒株虽不易引起免疫抑制,但突破MAb的能力较差,因此生产者很难较为准确地估算出肉雏鸡的最早免疫日龄[4]。本文拟评价中等毒力和中等偏强毒力两种不同IBD活pinnacle平博官网突破MAb的能力和对超强毒株攻击保护率,以帮助养禽生产者确定IBD活pinnacle平博官网的最佳免疫日龄。 1 材料 1.1 主要设备:负压隔离器若干套,购自苏州冯氏实验动物设备有限公司。 1.2 pinnacle平博官网和攻毒用毒株:IBD活pinnacle平博官网A(中等偏强毒力),购于国外某公司;IBD活pinnacle平博官网B(中等毒力),购自国内某公司;vvIBDV (成都株),系本公司自己分离,对14日龄SPF鸡致死率达100%。 1.3 试验动物和抗体检测试剂盒:3日龄商品代肉鸡购于洛阳某孵化场、IBD抗体检测试剂盒(FlockChek* 5040.00)购于北京爱德士元亨pinnacle平博网站技术有限公司。 2 方法 2.1 最佳免疫日龄的推算:从3日龄商品肉鸡60只中,随机取20只编为E组,采血分离血清,用IBDV ELISA抗体检测试剂盒(IDEXX)检测雏鸡母源抗体水平,根据Deventer公式推算最佳免疫日龄。         最佳免疫日龄=﹛(log275%鸡抗体滴度值- log2500)×3.5﹜+3+1         公式中:75%鸡抗体滴度值:将E组20只雏鸡的ELISA母源抗体滴度值从小到大排列,取前75%鸡抗体滴度的最大值;500:中等偏强毒力IBD活pinnacle平博官网的母源抗体突破滴度值;3.5:肉鸡的IBD ELISA母源抗体滴度半衰期;3:采血日龄;1:补偿值。 2.2 分组和免疫         将上述剩余40只肉鸡随机平均分为A、B、C和D组,10只/组,A组鸡滴口免疫pinnacle平博官网A,103.0ELD50/羽;B组鸡滴口免疫pinnacle平博官网B,104.0ELD50/羽;C组鸡为攻毒对照组,D组鸡为健康对照组,都不免疫。各组鸡均在负压隔离器中隔离饲养。 2.3 免疫效价测定         免疫后,每隔7日,取A组、B组和C组鸡采血,用ELISA抗体检测试剂盒检测IBD抗体水平;连续测定至免后35日。 2.4 攻毒日龄的确定         免疫后,每隔7日,分别从E组(攻毒对照组)中取5只鸡用vvIBDV (成都株)进行攻毒,攻毒途径为点眼,0.3ml/羽(10个囊感染指数),直到出现至少4/5发病或者法氏囊有明显病变时(变小或者出血),取免疫组和攻毒对照组鸡进行攻毒,攻毒方法同上。 2.5 攻毒后保护情况         攻毒后,连续逐日观察鸡只精神状态。在攻毒7日后,计算各组鸡发病率和死亡率,并将所有存活鸡致死后称体重,剖检法氏囊,观察其变化(颜色、大小和弹性)并称重,计算每只鸡的囊/体比,SPSS统计分析软件进行差异性显著分析。囊体比=法氏囊湿重(g)×1000/体重(g)。 3 结果与分析 3.1 免疫日龄的推算         20只3日龄肉鸡ELISA母源抗体滴度值如下:2638、4088、4999、5122、5368、5521、6236、6862、6955、7051、7557、7714、7744、8032、8159、8381、9056、9056、9151、9378。         免疫日龄=﹛(log28159-log2500)×3.5﹜+3+1=16日龄。 3.2 IBD活pinnacle平博官网免疫效力测定 3.2.1 免疫后ELISA抗体变化         免疫前(16日龄),雏鸡MAb滴度和抗体阳性率仍然很高,在用两种IBD活pinnacle平博官网免后第7日、第14日、第21日、第28日和第35日,各组鸡的IBD抗体平均滴度见表1。 表1.免疫后抗体变化
组别 免疫前和免疫后ELISA抗体滴度X±SD (阳性样品数/样品总数)
免疫前 免疫后7日 免疫后14日 免疫后21日 免疫后28日 免疫后35日
A 1213±564 (9/10) 427±264 (6/10) 58±71 (0/10) 738±732 (4/10) 1578±2160 (6/10) 2904±1119 (10/10)
B 1123±364 (9/10) 173±184 (2/10) 68±120 (0/10) 221±823 (2/10) 1242±2108 (2/10) 823±1405 (2/10)
C 1243±447 (9/10) 514±161 (4/10) 59±84 (0/10) 0 (0/10) 0 (0/10) 0 (0/10)
 
         从表1可见,至免后第14日,A组和B组鸡的ELISA抗体呈下降趋势,免疫后21日开始上升。但两组间存在明显差异,A组免后第21日开始抗体水平逐渐上升,抗体阳性率也随之上升。B组免疫后第21日和第28日,抗体水平缓慢上升;但在免后第35日却有所下降,并且抗体阳性率一直保持在较低水平(2/10)。结果表明,pinnacle平博官网A比pinnacle平博官网B更能有效突破雏鸡较高水平的MAb。 3.2.2 攻毒后保护         免后28日,另取E组5只健康对照鸡,用vvIBDV (成都株)进行攻毒,攻毒后3日,5只鸡出现精神沉郁、羽毛逆立、翅下垂和脱水等发病症状,7日后出现死亡,有的病死鸡胸肌和腿肌出血,法氏囊严重萎缩或出血,各组鸡攻毒后的发病和死亡情况结果详见表2。 表2、攻毒后各组鸡的发病和死亡情况
组别 病毒含量 (ELD50/羽) 免疫日龄 (日) 数量 (羽) 免后35日攻毒,攻毒第7日的情况
发病率 死亡率 囊/体比(X±SD)
A 103.0 16 10 0/10 0/10 0.90±0.48a
B 104.0 16 10 4/10 2/10 0.96±0.48a
C 10 8/10 4/10 0.67±0.10b
D 10 0/10 0/10 1.22±0.18c
注:小写相同字母表示差异不显著,小写不同字母表示差异显著。        从表2可以看出,免后35日将A、B和C组鸡进行攻毒,连续逐日观察7日,A组发病率和死亡率都为0/10。B组攻毒后3日的发病最严重(4/10),攻毒后7日死亡率2/10;C组发病率8/10,死亡率4/10;D组正常,无发病和死亡现象。         同时,A组和B组之间的囊/体比值差异不显著(P<0.05);但A组和C组、D组之间,B组和C组、D组之间以及C组和D组之间的囊/体比值差异显著(P>0.05)。         此外,试验观察结果表明,应用pinnacle平博官网A和pinnacle平博官网B后,vvIBDV攻击时均可引起两免疫组鸡法氏囊轻度萎缩,颜色和弹性正常,但是攻毒对照组(C组)鸡法氏囊萎缩最为严重,弹性消失。健康对照组(D组)鸡法氏囊大小、颜色和弹性均正常。 4 讨论         IBD活pinnacle平博官网在养禽业中广泛应用,但是因MAb的干扰和不同IBD活pinnacle平博官网毒力的差异,肉鸡IBDpinnacle平博官网的最早免疫日龄一直是生产场难以推算的难题。如果免疫过早,IBD活pinnacle平博官网中的病毒就会被高水平的MAb中和,影响pinnacle平博官网的免疫效果。而免迟了,又很易引起鸡群早期感染[5]。此外,不同毒力的活pinnacle平博官网突破MAb的能力也各有不同,中等偏强毒力的活pinnacle平博官网比低毒力和中等毒力的活pinnacle平博官网抵抗母源抗体能力强,可以诱发早期的免疫,但是强毒力的活pinnacle平博官网很容易引起法氏囊萎缩,引发免疫抑制,进而影响其他pinnacle平博官网的免疫效果。因此合理的pinnacle平博官网接种时间和选用合适毒力的活pinnacle平博官网是肉鸡IBD成功免疫的关键。         为使雏鸡尽可能早免疫,根据中等偏强毒力活pinnacle平博官网抵抗母源抗体的滴度(ELISA值1:500)确定最佳免疫时间。从空白雏鸡中采集20份血清。应用Deventer公式计算免疫时间,公式理论基础在于,在免疫时,鸡群中应有75%的鸡抗体滴度低于中和抗体滴度[5],应用此公式推算最佳免疫日龄有助于提高鸡群免疫成功率。此外,不同来源或者来源相同而批次不同的种蛋,雏鸡的母源抗体都会有所差异。因此,从理论上来讲,每一批鸡、每种IBDpinnacle平博官网的免疫程序都尽相同[6]。只就要求,在临床实践中,防疫人员要综合考虑可能影响IBD免疫效果的相关因素,对免疫程序进行科学的调整,通过多次的免疫效果评价,确定本养殖场的免疫程序。         根据Deventer公式估算最佳免疫时间,从而降低高母源抗体对活pinnacle平博官网免疫效果的干扰。A组鸡免疫后21日,虽然ELISA抗体滴度平均值小于B组,但是,抗体阳性率大于B组。此外,免疫后28日和35日,A组抗体滴度平均值和抗体阳性率均明显大于B组。免疫35日后,用超强毒株攻击,A组可保护试验鸡100%不发病,而B组发病率和死亡率分别为40%和20%。结果表明,免疫鸡血清ELISA抗体几何平均值和保护率呈正相关,中等偏强毒力的pinnacle平博官网A比中等毒力的pinnacle平博官网B更能有效突破母源抗体,尽早刺激机体产生保护性抗体,从而明显提高对超强毒株的攻击保护率。因此,建议在肉鸡养殖生产中,尤其是有VvIBDV流行地区,要选用中等偏强毒力的IBD活pinnacle平博官网B,以便尽早突破母源抗体,为鸡群提供有效保护。         在肉鸡养殖中,可以根据Deventer公式估算IBD活pinnacle平博官网(中等偏强毒力)最佳免疫日龄,及时有效的进行免疫,防止雏鸡早期感VvIBDV。使用中等偏强毒力的pinnacle平博官网A和使用中等毒力的pinnacle平博官网B相比,中等偏强毒力的pinnacle平博官网A能更早突破母源抗体,产生较高ELISA抗体水平,抗体阳性率也较高,对VvIBDV的攻击,可以提供100%保护。   参考文献: [1]Saif,Y.M. 主编,高福,苏敬良,索勋等主译。禽病学,第十一版。中国农业出版社;2005,178~199。 [2]陈溥言主编,兽医传染病,第五版。中国农业出版社;2006,362~365。 [3] Müller, H., Islam, R., and Raue, R.. Research on infectious bursal disease – the past the present and the future [J]. Veterinary microbiology, 2003, 97:153~165. [4]孙向华,杨润德,王琳等。鸡传染性法氏囊中等毒力活pinnacle平博官网(HZV株)安全及免疫效力试验[J]。中国兽医杂志,2008,44 (3):28~29。 [5]De Wit, JJ.. Gumboro disease-the optimal time for vaccination by Deventer formula [J] .Poultry. 2003, 11:19~23. [6]胡北侠,黄艳艳,路希山等。肉鸡接种传染性法氏囊活pinnacle平博官网后抗体水平的检测[J]。动物医学进展;2009,30 (1):43~45。
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